Главными героями игры являются водопроводчик Марио и его брат Луиджи (в качестве игрового персонажа для второго игрока). Цель игры — пройти через Грибное королевство, ускользая или уничтожая солдат черепашьего Короля Купы (также известного как Боузер), чтобы спасти захваченную им в плен Принцессу.